Home < Wskazówki i techniki pipetowania małych objętości

Wskazówki i techniki pipetowania małych objętości

20.06.2022r.

W obecnych czasach w laboratoriach coraz częściej wykonuje się badania z wykorzystaniem próbek o małej objętości. Istnieje więc potrzeba stosowania zaawansowanych technik pipetowania. Aby dokładnie wykryć mikroskopijne zmiany w próbkach o małych objętościach, probówki i fiolki są stopniowo zastępowane mikropłytkami, które wymagają odczynników w zakresie mikrolitrów/nanolitrów.

Podczas pracy z małymi objętościami czynniki takie jak temperatura i dokładność dozowania mają kluczowe znaczenie dla kontroli i poprawności procedur. Jeśli chcesz uzyskać spójne wyniki, musisz identyfikować i eliminować wszystkie potencjalne źródła błędów oraz regularnie monitorować jakość pracy w laboratorium. Dotyczy to błędów wynikających z używania niewłaściwych przyrządów do pipetowania, jak i niedokładnych technik pipetowania. Oto kilka wskazówek dotyczących dokładnego pipetowania małych objętości.

Używaj właściwych pipet automatycznych i końcówek do pipet

Ponieważ błędy objętościowe są bardziej widoczne przy małych objętościach próbki, ważne jest, aby wybrać pipetę, która dostarcza próbki w ilościach zgodnych z protokołem badania. Pamiętaj, aby wybrać najmniejszą możliwą pipetę do pobieranej objętości próbki. Na przykład, jeśli pipetujesz 1 µl próbki, użyj pipety 2-5 µl zamiast 20 µl.

Ponadto musisz wiedzieć, czy używasz odpowiedniego rodzaju pipety do rodzaju wykonywanej czynności. Na przykład pipety wyporowe są idealne do obsługi substancji lotnych, lepkich i innych rodzajów trudnych próbek. Zaleca się zapoznanie się z instrukcją obsługi producenta podczas doboru typu pipety do potrzeb eksperymentalnych. Większość błędów występujących w laboratorium jest związana z lotnością lub lepkością płynu oraz gwałtownymi zmianami środowiska. Należy upewnić się, że technika pipetowania jest zgodna z warunkami otoczenia, rodzajem próbki i objętością próbki.

Użyj prawidłowej techniki pipetowania

Istnieje wiele zasad dotyczących stosowania określonej techniki pipetowania dla cieczy o mniejszych objętościach. Na przykład należy upewnić się, że trzymasz pipetę w odpowiedniej pozycji pionowej i wyciągasz ją bezpośredno z pojemnika na próbkę, unikając dotykania bocznej powierzchni naczynia.

W przypadku próbki o objętości mniejszej niż 50 μl należy unikać trzymania pipety pod kątem, ponieważ zmieni to zasysaną objętość cieczy. Co więcej, jeśli końcówką pipety dotkniesz boku naczynia, spowoduje to proces przesiąkania, który zmniejszy objętość dozowanego płynu.

Ponadto ważne jest, aby po odessaniu i przed wyjęciem końcówki z płynu robić przerwy. Staraj się również używać stałego nacisku i prędkości tłoka. Należy delikatnie wciskać tłok aż do momenu zatrzymania, zanurzyć końcówkę pipety, a następnie puścić ją ze stałą prędkością. Jest to zalecane, ponieważ takie powtarzane działania mogą dawać powtarzalne wyniki.

Różne temperatury otoczenia

Podczas ustalania procesu pipetowania należy wziąć pod uwagę różne czynniki środowiskowe takie jak temperatura, ciśnienie i wilgotność w laboratorium. Eksperci zalecają, aby nie pipetować małych objętości w temperaturach niższych niż temperatura otoczenia. Czynnik ten będzie miał bezpośredni wpływ na dokładną objętość próbki pipetowanej przez urządzenie, ponieważ rozszerzalność powodowana wyższymi temperaturami prawdopodobnie zwiększy przestrzeń powietrza między próbką a końcówką pipety i znacznie zmniejszy dozowaną objętość.

Pipetowanie cieczy o małej objętości w odpowiednim środowisku laboratoryjnym pomaga drastycznie zmniejszyć błędy objętościowe, a także zapobiega nadmiernemu dozowaniu cieczy o niskiej temperturze. Ponadto podczas pracy z bardzo zimnymi lub gorącymi substancjami można używać pipety wyporowej, co pozwala zachować większą precyzję i dokładność.

Zwilż końcówki pipety

Aby prawidłowo pobrać i dozować próbki o małej objętości, przed rozpoczęciem procedury pipetowania należy wstępnie zwilżyć końcówki pipet. Wstępne zwilżanie rozumie się jako zanurzenie końcówki pipety w docelowej cieczy przed wykonaniem kolejnych etapów pipetowania.

Pomimo zastosowania sprawdzonej techniki pipetowania, brak zwilżenia końcówki może prowadzić do zwiększonego odparowywania i zmniejszenia objętości płynu. Wstępne zwilżenie umożliwia dozowanie dokładnych i precyzyjnych objętości cieczy poprzez zwiększenie poziomu wilgotności wewnątrz komory, co ogranicza odparowywanie cieczy.

Głębokość zanurzenia końcówki

Przed wykonaniem aspiracji ważne jest, aby prawidłowo zanurzyć końcówkę poniżej menisku. W przypadku pipet o dużej objętości (1-5 ml) głębokość zanurzenia powinna wynosić co najmniej 5-6 mm, natomiast w przypadku pipet o mniejszej objętości głębokość zanurzenia powinna wynosić około 2-3 mm.

Jeśli zanurzysz końcówkę zbyt płytko, szczególnie w przypadku pipety o dużej objętości, może to spowodować aspirację powietrza. Z drugiej strony, jeśli zanurzysz końcówkę bardziej niż to konieczne, płyn może przykleić się do jej powierzchni, prowadząc do błędów objętościowych.

Uwagi końcowe

Jeśli zignorujesz którykolwiek z wyżej wymienionych czynników, szanse wystąpienia błędów mogą drastycznie wzrosnąć, prowadząc do uzyskania niewiarygodnych wyników. W miarę zmniejszania się objętości próbki wpływ jej właściwości fizycznych, temperatury otoczenia i technik pipetowania stają się coraz bardziej widoczne, co sprawia, że ​​proces pipetowania jest dość zniechęcający. Przestrzeganie najlepszych praktyk i dbanie o kilka kluczowych aspektów prawdopodobnie poprawi technikę pipetowania i pomoże uzyskać bardzo dokładne wyniki, których szukasz!

 

Jeśli chcesz dowiedzieć się więcej o właściwościach oraz zaletach naszych pipetach automatycznych oraz końcówek do nich, skontaktuj się z nami pod adresem e-mail: bentleyPL@bentleyinstruments.com

Newsletter

Bądź na bieżąco z najnowszymi promocjami, seminariami i wydarzeniami. Wpisz poniżej swój adres e-mail i dołącz do naszego newslettera.